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Y2HGold Yeast Strain 酵母雙雜交用甘油菌的實(shí)驗(yàn)手冊(cè)
文章來源 : 齊岳生物
作者:zhn
發(fā)布時(shí)間 : 2022-08-23 12:41:44
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產(chǎn)品名稱:Y2HGold Yeast Strain 酵母雙雜交用甘油菌的實(shí)驗(yàn)手冊(cè)
產(chǎn)品描述:
名稱:Y2HGold Yeast Strain 酵母雙雜交用甘油菌其他名稱:Y2HGold酵母雙雜交用甘油菌規(guī)格:300μl運(yùn)輸溫度:干冰運(yùn)輸保存溫度:-20℃保存期:1年應(yīng)用:酵母雙雜交用菌株產(chǎn)品描述:酵母雙雜交系統(tǒng)是用于體內(nèi)研究蛋白相互作用的一種便利的工具,常用的如GAL4為基礎(chǔ)的雙雜交系統(tǒng),使用酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4來檢測(cè)轉(zhuǎn)錄后的蛋白相互作用。工作原理為:一個(gè)酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4由兩個(gè)可以分開,功能上相互的結(jié)構(gòu)域組成,N端有一個(gè)147個(gè)氨基酸組成的DNA結(jié)合域(DNA- BD),C端有一個(gè)由113個(gè)氨基酸組成的轉(zhuǎn)錄域(AD)。DB可以識(shí)別并結(jié)合上游序列(UAS),而AD能UAS下游基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄,單獨(dú)的BD或AD不能基因轉(zhuǎn)錄。正常情況,BD和AD不會(huì)結(jié)合,將待檢測(cè)的分別與BD和AD融合,形成誘餌融合蛋白(bait-DNA)和誘捕融合蛋白(prey-DNA),只有當(dāng)誘餌和誘捕蛋白發(fā)生相互作用,促使BD和AD的相互接近,形成GAL4,從而報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。Y2HGold是GAL4系統(tǒng)酵母雙雜交用實(shí)驗(yàn)菌株,能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)?;蚺cMATα型酵母菌株Y187通過接合(mating)操作進(jìn)行蛋白相互作用驗(yàn)證或雙雜交文庫(kù)篩選和構(gòu)建。Y2HGold-GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用,分別為pGBKT7和pGADT7。前者篩選標(biāo)志為Trp,用于表達(dá)DNA-BD與誘餌蛋白(bait)的融合蛋白;后者篩選標(biāo)志為L(zhǎng)eu,用于表達(dá)AD與誘捕蛋白(prey)的融合蛋白。Y2HGold有四個(gè)報(bào)告基因:AUR1-C,HIS3, ADE2, MEL1,分別由三個(gè)完全異源的Gal4反應(yīng)啟動(dòng)元件-G1,G2,M1調(diào)控,這三種啟動(dòng)子只有GAL4識(shí)別的17bp區(qū)相同,其余部分同。這一特征縮減假陽(yáng)性發(fā)生的概率。因?yàn)?,誘捕蛋白單獨(dú)結(jié)合引起假陽(yáng)性都需要識(shí)別3個(gè)不同序列,4個(gè)報(bào)告基因表達(dá)。另外,新報(bào)告基因AUR1-C與以往的營(yíng)養(yǎng)缺陷報(bào)告基因相比,其篩選-金擔(dān)子素(Aureobasidin A,AbA)可以殺死非抗性克隆,大大降低背景克隆的生長(zhǎng)。具有更低背景,這一特點(diǎn)也可降低酵母雙雜交假陽(yáng)性發(fā)生的概率。基本信息:培養(yǎng)基:YPDA培養(yǎng)條件:28℃,YPDA,有氧培養(yǎng)保存方式:30%甘油,-20℃保存轉(zhuǎn)化方式:PEG/LiAC;電激;基本應(yīng)用:酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)保存與運(yùn)輸方法保存:-20℃保存,一年。運(yùn)輸:干冰運(yùn)輸。使用說明:齊岳生物提供的各批次質(zhì)粒菌株發(fā)貨前均經(jīng)過嚴(yán)格的多重驗(yàn)證,如存在質(zhì)量問題,請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品三個(gè)月內(nèi)通知我司。收到甘油菌后,請(qǐng)及時(shí)在固體平板上劃線培養(yǎng),挑取單菌落接種到液體培養(yǎng)基中,震蕩培養(yǎng)后使用并保存新的甘油菌。注意事項(xiàng)1.使用甘油菌時(shí)可不完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂布固體瓊脂平板即可;也可完全融解后使用,但隨著凍融次數(shù)的增加,菌株的活力會(huì)逐漸下降。2. 為了您的和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。供應(yīng)產(chǎn)品目錄:?SD/-Ade with AgarSD/-Ade/-His with AgarSD/-Ade/-His/-Leu/-Met/-Trp with AgarSD/-Ade/-His/-Leu/-Met-Trp/-Ura with AgarSD/-Ade/-His/-Leu/-Trp with AgarSD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/-Ura with AgarSD/-Ade/-His/-Met with AgarSD/-Ade/-His/-Trp with AgarSD/-Ade/-Leu with AgarSD/-Ade/-Leu/-His with AgarSD/-Ade/-Leu/-Trp with AgarSD/-Ade/-Trp with AgarSD/-Arg/-His/-Leu/-Lys/-Ura with AgarSD/-Cys/-Met/-Ura with AgarSD/-Glu/-Ura with AgarSD/-His with AgarSD/-His/-Leu with AgarSD/-His/-Leu/-Met/-Trp with AgarSD/-His/-Leu/-Met/-Ura with AgarSD/-His/-Leu/-Trp with AgarSD/-His/-Leu/-Trp/-Ura with AgarSD/-His/-Leu/-Ura with AgarSD/-His/-Trp with AgarSD/-His/-Trp/-Ura with AgarSD/-His/-Ura with AgarSD/-Leu with AgarSD/-Leu/-Ile/-Val with AgarSD/-Leu/-Met/-Trp with AgarSD/-Leu/-Met/-Trp/-Ura with AgarSD/-Leu/-Trp with AgarSD/-Leu/-Trp/-Ura with AgarSD/-Leu/-Ura with AgarSD/-Met with AgarSD/-Met/-Trp with AgarSD/-Trp with AgarSD/-Trp/-Ura with AgarSD/-Ura with Agaryyp2021.2.3 相關(guān)目錄: 明膠甲基丙烯?;℅elMA)生物墨水自 DO Supplement -Trp配制、種類及用途聯(lián)系我們:
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